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GST融合蛋白純化磁珠

海貍GST融合蛋白純化磁珠是專為高效、快速純化谷胱甘肽S-轉移酶(GST)融合蛋白而設計的一種新型功能化材料, 可通過磁性分離方式直接從生物樣品中一步純化出高純度的目標蛋白,極大地簡化純化工藝和提高純化效率,適合 科研和工業領域便捷地進行GST融合蛋白的純化。
與傳統的柱層析純化方式相比,采用海貍磁珠純化GST融合蛋白,無需對粗蛋白樣品進行多次長時間的高速離心, 也不需要過濾操作;無需控制流速,更不需要昂貴的層析設備。樣品與磁珠的特異性結合、洗滌和目標蛋白洗脫變 得非常簡單、快速、易操作,不存在樣品流速控制的瓶頸,對于熟練的操作者來說,在一個小時內就能獲得高純度 的目的蛋白,不僅為研究者簡化了流程,節省了時間,降低了成本,并可提高目標蛋白的純化效率。使用磁珠能輕 松實現多樣品平行處理,實現高通量,也可任意放大樣品純化規模。
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BeaverBeads? GSH 70601-5 10%(v/v) 5mL ¥1000.00
BeaverBeads? GSH 70601-100 10%(v/v) 2x50mL ¥5000.00
BeaverBeads? GSH 70601-1000 10%(v/v) 4x250mL ¥30000.00
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產品名稱 BeaverBeads™ GSH
磁珠粒徑 30μm~150μm
GST融合蛋白結合量 可達10mg/mL磁珠(100%)
懸液濃度 10%(v/v)磁珠懸液
保存液 20%(v/v)乙醇
保存溫度 4℃~30℃ (長期保存,建議置于4℃~8℃)
化學穩定性 常溫可耐受70%乙醇、6M鹽酸胍、0.1M氫氧化鈉、0.1M醋酸1h

應用實例

1. 磁珠與傳統層析柱純化GST融合蛋白對比

注:圖中2%、5%、10%、20%和100%指的是分別用谷胱甘肽含量為0.2mM、0.5mM、1mM和10mM的緩沖液對吸附目標蛋白后的磁珠進行洗脫。

2.平行操作穩定性高,可方便實現高通量和大規模蛋白純化

                        結果:CV(目標蛋白純度) = 1.6%,CV( 目標蛋白載量)= 4.5%。

此外,放大規模純化樣品時,只需同比例增加磁珠用量即可,并不影響目標蛋白的產率和純度,完全不存在流速和樣品體積的限制,海貍磁珠更加適用于大規模蛋白純化生產。

3.不同批次間產品使用性能穩定,批次間差異小

                         結果:CV(目標蛋白純度)= 0.7%,CV( 目標蛋白載量)= 4.7%

4.可重復使用

結果顯示:同一樣品,重復使用5次后,其目標蛋白載量沒有明顯下降,目標蛋白純度基本不變。為了保障純化的質量,建議3~5次后,進行清洗使用處理。

品特性

1. 蛋白純化快捷

  •  操作簡單,一步純化即可得到高純度蛋白;
  • 方便快捷,一個小時輕松實現蛋白純化。

2. 蛋白純化靈活

  •  可同時處理多個樣品,實現高通量;
  •  可輕松實現蛋白濃度和體積的控制,方便后續樣品精制;
  •  可輕松實現對純化規模的控制;
  • 對微量和低豐度樣品具有良好的純化效果。

3. 蛋白純化經濟

  •  純化流程短,蛋白產量及活性高;
  •  設備簡單,減少了設備購買及維護成本,蛋白純化門檻大大降低;
  •  純化時間短,節約了時間成本;
  •  可同時進行多樣品處理,實現自動化操作,節約人工成本;
  •  能夠重復使用。

 

引用文獻:

  1. Identification of Interacting Motifs Between Armadillo Repeat Containing 1 (ARC1) and Exocyst 70 A1 (Exo70A1) Proteins in Brassica oleracea;PROTEIN JOURNAL  卷: 35   期: 1   頁: 34-43   出版年: FEB 2016
  2. A Novel Polyclonal Antiserum against Toxoplasma gondii Sodium Hydrogen Exchanger 1;KOREAN JOURNAL OF PARASITOLOGY  卷: 54   期: 1   頁: 21-29   出版年: FEB 2016
  3. A pair of transposon‐derived proteins regulate active DNA demethylation in Arabidopsis;EMBO JOURNAL  卷: 35   期: 18   頁: 2060-+   出版年: SEP 15 2016
  4. 泛素結合酶RAD6多克隆抗體的制備及初步鑒定;中國處方藥 
  5. Orf Virus 002 Protein Targets Ovine Protein S100A4 and Inhibits NF-κB Signaling;FRONTIERS IN MICROBIOLOGY  卷: 7     文獻號: 1389   出版年: SEP 13 2016
  6. N-terminal domains of ARC1 are essential for interaction with the N-terminal region of Exo70A1 in transducing self-incompatibility of Brassica oleracea;ACTA BIOCHIMICA ET BIOPHYSICA SINICA  卷: 48   期: 9   頁: 777-787   出版年: SEP 2016
  7. Identification of Interacting Motifs Between Armadillo Repeat Containing 1 (ARC1) and Exocyst 70 A1 (Exo70A1) Proteins in Brassica oleracea;PROTEIN JOURNAL  卷: 35   期: 1   頁: 34-43   出版年: FEB 2016
  8. The potassium channel FaTPK1 plays a critical role in fruit quality formation in strawberry (Fragaria× ananassa);Plant Biotechnology Journal (2017), pp. 1–12,DOI: 10.1111/pbi.12824
  9. Functional characterization of rice CW-domain containing zinc finger proteins involved in histone recognition;Plant Science 263 (2017) 168–176,DOI:10.1016/j.plantsci.2017.06.013
  10. EV71 病毒中和表位和諾如病毒P 結構域嵌合蛋白的原核表達;China Biotechnology,2017,37( 1) : 1-6, DOI: 10.13523 /j.cb.20170101

70601-GST融合蛋白純化磁珠說明書.pdf

GST融合蛋白純化篇
1.如何純化GST融合蛋白?

2.可純化蛋白種類


3.磁珠掛不上目的蛋白
以下的處理方案的前提是樣本里面有目的蛋白,如果是包涵體需要變性。
可能一:結合條件不對
理想的結合條件為pH 6.5-8.0,純化之前確認磁珠是否采用緩沖液平衡以及蛋白樣本的pH值,低于pH6.5或高于pH8時,融合蛋白與磁珠結合不充分導致結合效率低。
可能二:樣本中目的蛋白的濃度偏低
目的蛋白的濃度過低,會嚴重影響磁珠與蛋白的結合。
兩種方法可供選擇:
a)濃縮蛋白樣本;b)增加磁珠的濃度
可能三:檢查目的蛋白是否聚集沉淀
在細胞裂解前加入DTT,在緩沖液中也加入DTT 。1-20mM的DTT 會顯著增加某些GST融合蛋白的結合。
可能四:判斷是否是因為GST失活
過度超聲會破壞標簽蛋白而減少其與磁珠的結合。減少超聲破碎的時間和強度。
可能五:標簽蛋白可能改變了GST 構相
降低結合的溫度來改善結果。

4.目的蛋白在磁珠上,洗脫不下來
第一步:判斷是否結合
取Mag beads加loading buffe煮沸,再跑page電泳。
如果確認有蛋白,且載量還很高,那么極有可能是形成了過蛋白沉積。
太多的蛋白沉積在磁珠孔內,無法洗脫。建議將目的蛋白樣本稀釋,少量純化。
第二步:調節洗脫條件
洗脫緩沖液pH,酸性的都洗不下蛋白。盡量將洗脫液的pH值調到8.0。

5.洗脫樣本里面有雜蛋白
可能一:非特異性吸附
提高平衡緩沖液中的鹽濃度可以降低因為離子作用帶來的非特異吸附。
在平衡緩沖液中添加0.5%吐溫或Triton可以避免因為疏水相互作用導致非特異吸附,這些措施都可以電泳的雜帶明顯減少。
可能二:26KD的GST條帶
GST融合蛋白的表達系統很容易表達到GST部分就終止,所以26KD左右的雜帶是很常見的,那可以選擇用不同濃度的還原谷胱甘肽去做階段洗脫,如果還是分不開,那也許就得選擇離子交換或者凝膠過濾等別的分離手段。
可能三:蛋白降解
如果用上述方法還是雜帶多,那就地回頭去看看破碎的條件是不是太劇烈或者溫度控制不好導致蛋白短裂或者分解導致一些蛋白片段帶標簽,或者因為樣品長時間保存導致水解等
可能四:蛋白相互作用
蛋白相互作用形成聚合體,導致雜帶增加,而由于疏水相互作用或者因為離子作用可以通過添加表面活性劑或者增加離子強度得到改善,對于因為形成聚合體的可以在緩沖液和樣品中加1-2mM巰基乙醇避免。

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關于海貍

海貍公司創立于2011年底,落戶在風景秀麗的蘇州工業園區獨墅湖畔生物醫藥產業園(BioBAY)。公司以納米磁珠技術和生物材料表面技術為核心,通過試劑開發和設備技術整合,面向生物科研、體外診斷和基因檢測領域,提供科研和工業級別的納米磁珠原料、蛋白偶聯中間體、免疫磁珠、核酸提取試劑盒、輔助生物耗材及配套自動化設備等系列產品。

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