莱加内斯一皇马

回顧2016海貍磁珠重大應用系列專題一 2017/01/11

導讀:——HIV-1整合酶抑制劑檢測

回顧2016海貍磁珠重大應用系列專題一

——HIV-1整合酶抑制劑檢測

       HIV-1(I型人類免疫缺陷病毒)在宿主細胞內經過逆轉錄得到的cDNA,由整合酶(inergrase,IN)催化插入到宿主基因組DNA中,該過程稱為整合過程。整合是HIV-1復制周期中不可缺少的步驟,對于病毒的復制至關重要,因此對整合酶的抑制能夠有效地起到抗HIV的作用。
       目前,FDA批準的治療方案以HIV-1生命周期的三個階段——融合過程、逆轉錄過程和蛋白水解過程為靶點。這三個靶點的抑制劑相結合的聯合療法,通常稱為高效抗病毒療法,是目前治療AIDS的標準方案。盡管這種方法能夠顯著的抑制HIV-1的復制,提高了感染病人的生活質量,但并不能有效治愈。而且,耐藥病毒的突變株的出現,使得整個治療方案受到明顯的限制。因此,新的抗病毒靶點的研究對于AIDS的治療有著重要意義。細胞輔因子LEDGF/p75對整合酶具有穩定作用,在LEDGF/p75缺陷的感染細胞中,整合酶很快被降解,HIV-1的復制和感染被阻斷,大量研究證明干擾LEDGF/p75的作用是抑制HIV復制感染的有效途徑。
       中國醫學科學院藥用植物研究所和北京協和醫學院郭順星和孟志霞等人利用磁性微球的生化分析方法,開發了一種新型的針對于HIV整合酶和細胞輔因子LEDGF/p75之間的蛋白質相互作用的篩選方法,以鑒定HIV-1整合酶抑制劑。此外,該方法亦能夠適用于FDA批準的其他1000多種PPI(protein-protein interaction)藥物篩查。

該檢測方法主要步驟如下圖A:
a)GST-IBD與His-CCD置于微孔板中孵育結合,形成PPI復合物
b)采用鎳離子螯合磁珠(BEAVER,70501)捕獲PPI復合物
c)采用堿性磷酸酶(ALP)標記的GST抗體和ALP發光底物進行PPI復合物的定量檢測當PPI抑制劑存在時,GST-IBD無法形成PPI復合物,因此磁珠無法捕獲GST-IBD,從而無發光信號。


圖A) 采用磁珠法進行PPI復合物抑制劑檢測的主要步驟:首先,GST-IBD與His-CCD置于微孔板中孵育結合,形成PPI復合物。然后,采用鎳離子螯合磁珠(BEAVER,70501)捕獲PPI復合物。繼而采用ALP標記的GST抗體和ALP發光底物進行PPI復合物的定量檢測。CCD和IBD分別是整合酶和p75蛋白上的相互作用區域,當存在抑制劑時,CCD與IBD無法作用,即無發光值。

參考文獻:
A Novel Assay for Screening Inhibitors Targeting HIV Integrase LEDGF/p75 Interaction Based on Ni2+ Coated Magnetic Agarose Beads. Sci Rep. 2016 May 3; 6:25375.

備注:更多關于海貍產品應用文獻請參考官網http://www.j9s6.com產品信息一欄

關于我們
關于海貍

海貍公司創立于2011年底,落戶在風景秀麗的蘇州工業園區獨墅湖畔生物醫藥產業園(BioBAY)。公司以納米磁珠技術和生物材料表面技術為核心,通過試劑開發和設備技術整合,面向生物科研、體外診斷和基因檢測領域,提供科研和工業級別的納米磁珠原料、蛋白偶聯中間體、免疫磁珠、核酸提取試劑盒、輔助生物耗材及配套自動化設備等系列產品。

聯系我們
  • 電話:400-600-3979
  • 地址:蘇州工業園區華云路1號桑田島科創園B區4號樓
莱加内斯一皇马 秒速赛 8号彩票网络地址 浙江风采网华东15选5走势图 新时时彩分析软件 山东群英会开奖图 三分赛车计划公式 内蒙古时时最新开奖结果 大乐透最近500期开奖结果 我要下载山东老十一选五 北京赛车pk开奖记录 河北省福利彩票官网 pk10是正规彩票吗